1. 血清必須貯存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一 瓶，可將40～45 ml 分裝于無(wú)菌50 ml 離心管中，由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10 %， 必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。
2. 一般廠商提供之血清為無(wú)菌，不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加 入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾，勿直接過(guò)濾血清。
3. 瓶裝(500ml) 血清解凍步驟(逐步解凍法): -20 oC 或–70 oC 至4 oC 冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以50 ml 無(wú)菌離心管可分裝40～45 ml。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖 晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20 oC 直接 至37 oC 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
4. heat-inactivation 是指56 oC, 30 分鐘加熱已完全解凍之血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份(complement) 去活化。除非必須，一般不建 議作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。補(bǔ)體參與之反應(yīng)有： cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells andplatelets, enhanced phagocytosis, chemotaxis and activation of lymphocytic and macrophage cell type。
5. 勿將血清置于37 oC 太久，若在37 oC 放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。
6. 血清之沉淀物
6.1. 凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性 及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沉淀物不會(huì)影響血清本 身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沉淀物，可用離心3000 rpm, 5 min 去除，或離心后上 清液可以加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沉淀物，因?yàn)闀?huì)阻塞過(guò)濾膜。
6.2. 顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”：通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多。 有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染，而將血清 放在37 oC 中欲培養(yǎng)此“微生物“，但在37 oC 環(huán)境下，又會(huì)使此沉淀物增多，更 會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè)，又沒(méi)有污染。一般而言，此 小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng)，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號(hào)的血清。
7. 血清之生長(zhǎng)測(cè)試
7.1. 材料：
7.1.1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
7.1.2. a-MEM (alpha modified minimal essential medium, GibcoBRL 12000-022 )
7.1.3. 6-well TC plate (or 35mm TC dish)
7.1.4. methanol
7.1.5. glacial acetic acid
7.1.6. 10 % Giemsa solution(GibcoBRL 10092-013)
7.2. 步驟：
7.2.1. 以a-MEM with 10 % FBS (已測(cè)試過(guò)) 培養(yǎng)MDCK 細(xì)胞于T75 flask 至80 % confluency。
7.2.2. 以trypsin-EDTA 處理細(xì)胞，離心后，加入適量不加血清之a(chǎn)-MEM 制成細(xì)胞懸浮液，并測(cè)細(xì)胞濃度。以不加血清之a(chǎn)-MEM 稀釋細(xì)胞濃度為1×102 活細(xì)胞數(shù)/ ml。
7.2.3. 將1 ml 細(xì)胞懸浮液接種入6-well plate 中，并另加入1 ml 含不同濃度的血清(20 % , 10 % , 4 % , 2 % , 1 % , 0.4 %) 之a(chǎn)-MEM，使血清最終濃度為10 % , 5 % , 2 % , 1 % , 0.5 % , 0.2 %。用已測(cè)試過(guò)之血清同時(shí)進(jìn)行對(duì)照組試驗(yàn)。
7.2.4. 37 oC，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)5-7 天，期間不需更換培養(yǎng)基，待細(xì)胞群落大到可以肉眼觀察，而群落間不互相接觸即可。
7.2.5. 去除培養(yǎng)基，加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1)，室溫下靜置10 min。
7.2.6. 去除固定液，水洗二次。
7.2.7. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室溫下靜置染色2-3 min。
7.2.8. 去除染液，水洗二次。
7.2.9. 以肉眼計(jì)數(shù)群落數(shù)
7.2.10. 計(jì)算SPE ( Serum Plating Efficiency )：SPE = ( no. of colonies / well )/100x100%
7.2.11. 計(jì)算RPE(Relative Plating Efficiency)：SPE=[total colonies of six well(test)/Total colonies of six well(control)]x100%
7.3. 比較各濃度血清培養(yǎng)基之RPE，即可得知待測(cè)血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
7.4. 訂購(gòu)多量同一批號(hào)的優(yōu)良血清，置于–70 oC 保存之
