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人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)介紹:

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)Oettgen F 及其同事從一名29 歲的患有廣泛、快速進(jìn)展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導(dǎo)管中分離建立的。該細(xì)胞可產(chǎn)生黑色素,電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關(guān)。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%他疾病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對(duì)該細(xì)胞系的抗體。

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)特性:

1) 來源:皮膚黑色素瘤

2) 形態(tài):球形,懸浮生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:

1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)用途:僅供科研使用。

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞(SK-MEL-1)培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備MEM-EBSS 培養(yǎng)基(Minimum Essential Medium (MEM Eagles with EarlesBalanced Salts) (MEM-EBSS) )( MEM,GIBCO,41500034,添加EBSS),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為95%

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按12 13 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM 條件下離心4 分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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