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人肝癌細(xì)胞(HepG2.2.15)

表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15介紹:乙型肝炎病毒(HBV)是一種引起急性和慢性壞死炎癥性肝病及肝細(xì)胞癌的DNA病毒。HBV 具有特異嗜肝性、非細(xì)胞損傷與裂解、易發(fā)展為慢性等特征。表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15是能夠表達(dá)HBV 抗原和分泌完整HBV 顆粒的肝胚瘤細(xì)胞系,也是目前用來研究HBV復(fù)制.肝細(xì)胞對干擾素(IFN)應(yīng)答最為合適的細(xì)胞。

表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15特性:

1) 來源:肝

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min 后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15用途:僅供科研使用。

表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15培養(yǎng)步驟:

一.表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞(HepG2.2.15培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備DMEM-H 培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO31.5g/L,2mM L-谷氨酰胺,500μg/ml G418)95%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度。

3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?a href="http://www.judamu.cn/goods-2730.html">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 細(xì)胞懸液按11的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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