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人胎盤絨膜癌細胞BEWO

一、細胞培養(yǎng)條件

細胞英文名稱 :BEWO

細胞中文名稱 :人胎盤絨膜癌細胞

生長特性 :貼壁

培養(yǎng)體系:F12K+10%FBS 疏松貼壁,如有漂浮離心收集

傳代方法建議第一次 1:2 傳代

傳代情況:2 天換液

凍存條件細胞庫無血清凍存液  

備注收集瓶中培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)。

二、細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到 細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴 格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察:未超過 80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng) 液收集至離心管中,加入 6ml 完全培養(yǎng)基,放入 375%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時, 根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,處理 完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外 一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基)

三、細胞培養(yǎng)步驟

1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加入 5mL 培養(yǎng)基 混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘,棄去上清液,補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然 后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入 6cm 皿中),培養(yǎng)過夜。第二 天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。  

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 1-2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37培養(yǎng)箱中消化 1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺, 輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按 12 15 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液 的新皿中或者瓶中。

PS:若客戶收到 2ml 小管細胞,收到細胞后,用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或 安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿,加入 5ml 左右完 全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過 80%,換液繼續(xù)培養(yǎng), 視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%,可直接進行傳代(方法同上)。

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